定量蛋白质组学显示OGT蛋白酶响应于氧化应激而改造

  • Marissa Martinez.
    隶属关系
    生物化学系,约翰霍普金斯大学医学院,巴尔的摩,马里兰州21205,美国

    目前在Foghorn Therapeutics,剑桥, 马萨诸塞州02142,美国
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  • Santosh Renuse.
    隶属关系
    生物化学系,约翰霍普金斯大学医学院,巴尔的摩,马里兰州21205,美国

    McKusick-Nathans遗传医学研究所,约翰霍普金斯大学医学院,巴尔的摩,马里兰州21205,美国

    目前在实验室医学和病理学部,Mayo Clinic,罗切斯特,明尼苏达州55905,美国

    目前位于罗切斯特,明尼苏达州的个性化医学中心,Mayo Clinic,55905,美国
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  • 西蒙斯卡默尔
    隶属关系
    生物化学系,约翰霍普金斯大学医学院,巴尔的摩,马里兰州21205,美国

    大学霍普金斯大学医学院的质谱与蛋白质组学设施,马里兰州巴尔的摩21205

    目前处于高级临床生物系统研究所,SMIDT心脏研究所,Cedars Sinai Medical Center
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  • 罗伯特o'meally
    隶属关系
    生物化学系,约翰霍普金斯大学医学院,巴尔的摩,马里兰州21205,美国

    大学霍普金斯大学医学院的质谱与蛋白质组学设施,马里兰州巴尔的摩21205
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  • 彼得诺夫
    隶属关系
    生物化学系,约翰霍普金斯大学医学院,巴尔的摩,马里兰州21205,美国

    目前在内科,耶鲁纽约医院,耶鲁医学院,330 Cedar St,纽黑文,CT 06510
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  • Anil K. Madugundu
    隶属关系
    生物化学系,约翰霍普金斯大学医学院,巴尔的摩,马里兰州21205,美国

    McKusick-Nathans遗传医学研究所,约翰霍普金斯大学医学院,巴尔的摩,马里兰州21205,美国

    目前在实验室医学和病理学部,Mayo Clinic,罗切斯特,明尼苏达州55905,美国
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  • Raja Sekhar Nirujogi.
    隶属关系
    生物化学系,约翰霍普金斯大学医学院,巴尔的摩,马里兰州21205,美国

    McKusick-Nathans遗传医学研究所,约翰霍普金斯大学医学院,巴尔的摩,马里兰州21205,美国

    目前在医学研究委员会(MRC)蛋白磷酸化和Ubiquitylation单位,Dundee大学生命科学学院,Dow Street,Dundee DD1 5eh,U.K.
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  • raiha tahir.
    隶属关系
    生物化学系,约翰霍普金斯大学医学院,巴尔的摩,马里兰州21205,美国

    生物化学,细胞和分子生物学研究生计划,约翰霍普金斯大学医学院,巴尔的摩,马里兰州21205,美国

    目前在Ginko BioWorks,马萨诸塞州02210,美国
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  • 罗伯特科尔
    隶属关系
    生物化学系,约翰霍普金斯大学医学院,巴尔的摩,马里兰州21205,美国

    大学霍普金斯大学医学院的质谱与蛋白质组学设施,马里兰州巴尔的摩21205
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  • Akhilesh Pandey.
    隶属关系
    生物化学系,约翰霍普金斯大学医学院,巴尔的摩,马里兰州21205,美国

    McKusick-Nathans遗传医学研究所,约翰霍普金斯大学医学院,巴尔的摩,马里兰州21205,美国

    目前在实验室医学和病理学部,Mayo Clinic,罗切斯特,明尼苏达州55905,美国

    目前位于罗切斯特,明尼苏达州的个性化医学中心,Mayo Clinic,55905,美国

    Manipal高等教育学院,Manipal 576104,Karnataka,印度
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  • Natasha E. Zachara.
    一致
    通讯作者:Natasha E. Zachara Ph.D.,725 N.Wolfe Street,Baltimore,MD 21205,USA电话:410 955 7049,传真:410 955 5759
    隶属关系
    生物化学系,约翰霍普金斯大学医学院,巴尔的摩,马里兰州21205,美国

    肿瘤学系,约翰霍普金斯大学医学院,巴尔的摩,马里兰州21205,美国
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开放访问发布:2021年3月11日 DOI: //doi.org/10.1016/j.mcpro.2021.100069

      强调

      • O-GlcNAC水平因伤害而动态变化
      • 损伤不会诱导循环O-GLCNAC的酶活性的变化
      • OGT. 与可能改变基材靶向的多种蛋白质组
      • 定量蛋白质组学鉴定和验证了OGT的交互式
      • OGT. 的互动组响应于氧化应激而显着变化

      抽象的

      细胞内特异性丝氨酸和苏氨酸残基的动态改性 蛋白质通过O-连接的N-乙酰基-β-D-葡糖胺(O-GLCNAc)减轻损伤和促进 各种压力模型中的细胞保护。 O-glcnac转移酶(OGT)和 O-Glcnacase(OGA)是分别添加和移除O-GlcNAc的唯一酶, 来自数千个基板。仍然尚不清楚两种酶可以具体 控制以影响靶蛋白的糖基化和信号通路 在基本上并响应压力。几种证据表明蛋白质 互动者通过影响OGT和OGA活动,本地化来调节这些反应 和衬底特异性。提供对OGT函数的机制的洞察 受到控制,我们利用定量蛋白质组学来定义OGT的基础和 应激诱导的椎间体。 OGT及其互动伙伴被免疫沉淀 来自OGT野生型,无氧化氢处理的细胞裂解物 用光,中和重赖氨酸和精氨酸(稳定同位素)标记 细胞培养中氨基酸的标记[硅胶])。总共超过130个蛋白质 被发现与OGT相互作用,其中许多在氢气中改变它们的结合 过氧化物应激。这些蛋白质包括主要OGT切割和糖基化基质, 宿主细胞因子1,其呈现在压力之后的时间依赖性解离。 验证较少良好的表征互动剂,例如甘油醛3-磷酸盐 脱氢酶和组蛋白脱乙酰酶1,我们转向平行反应监测, 重新承载了我们的发现基础氧化剂方法。虽然大多数蛋白质 鉴定是新的OGT交流剂,其中64%以前表征了糖基化 包含各种域架构和功能的目标。这些数据一起共同 证明OGT在应力响应中与独特和特定的互动者相互作用 manner.

      图形概要

      缩写:

      4MU (4-甲基umb蛋露糖果 ), p38mapk. (P38丝裂原激活蛋白激酶 ), ACAA2 (3-酮酰基-CoA硫酶 ), ANKRD17. (Ankyrin重复含域的蛋白质17 ), asns (天冬酰胺合成酶 ), ASXL1 (推定的Polycomb组蛋白AsxL1 ), ATAD2 (AAA含域的蛋白2 ), BAG6 (大型脯氨酸富含蛋白袋6 ), BCOR-L1 (Bcl-6共压制蛋白1 ), CARM1 (CaCtivator相关的精氨酸甲基转移酶1 ), CKII. (酪蛋白激酶II ), 梳理Lys. (合并裂解物 ), DES. ( 德尔姆 ), eIF3b (真核翻译启动因子3亚基B. ), Fasn. (脂肪酸合成酶 ), f (Ferrochelatase. ), fl (全长 ), Foxo. (daf-16 ), H2O2 (过氧化氢 ), GFAT. (谷氨酰胺 - 果糖-6-磷酸转氨酶 ), GTSE1 (G2和S相表达蛋白1 ), HCD. (更高的能源碰撞解离 ), HDAC1 (组蛋白脱乙酰酶1 ), HRP. (马萝卜过氧化物酶 ), HSC70 (热休克同源71 ), HCF-1 (宿主细胞因子1 ), HIVEP1 (锌指蛋白40 ), HSF1 (热休克因子蛋白1 ), KANSL1 (KAT8监管NSL复杂亚基1 ), KANSL3 (KAT8监管NSL复杂亚基3 ), KIF5B (kinesin重链 ), LRPPRC. (富含含氨酸的PPR含蛋白质 ), LC-MS / MS (液相色谱质谱/质谱 ), GAPDH. (甘油醛-3-磷酸脱氢酶 ), MEFS. (小鼠胚胎成纤维细胞 ), MYPT1 (肌球蛋白磷酸酶目标亚基1 ), NCE. (归一化碰撞能量 ), 空值 ( OGT. 淘汰赛 ), NUP188 (核偶素NUP188同源物 ), oga. (O-GlcNacase. ), O-Glcnac. (O-连接的N-乙酰-β-D-葡糖胺 ), OGT. (O-glcnac转移酶 ), PCK2 (磷丙酮酸羧基酶2 ), PGC-1α (增殖剂活化受体γ共催胶剂1-α ), precl lys. (预清除裂解物 ), PRM. (并行反应监测 ), PTM. (翻译后修改 ), PTPN14 (酪氨酸蛋白磷酸酶非受体14型 ), RANBP9 (RAN结合蛋白9 ), sc (短链特异性酰基-CoA脱氢酶 ), SEM. (标准错误的平均值 ), SETD1A (组蛋白溶差N-甲基转移酶SETD1A ), 萨拉克 (细胞培养中氨基酸的稳定同位素标记 ), TBS. (TRIS缓冲盐水 ), TBST. (Tris缓冲盐水与TWEEN-20 ), TCL. (总细胞裂解物 ), 茶科 (三乙基碳酸氢铵 ), TET3 (Tet甲基胞嘧啶二恶英酶3 ), TNKS1BP1 (182 kda tankysyase-1结合蛋白 ), TPR. (四肽重复 ), TRAK1 (贩运Kinesin结合蛋白1 ), TRAK2 (贩运kinesin结合蛋白2 ), uap. (UDP-N-乙酰己糖胺酸化酶 ), WT. (野生型)

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