蛋白质组学鉴定 Coxiella..buretii 在感染期间靶向宿主细胞线粒体的效应蛋白

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    生物化学与分子生物学与生物化学和生物学科学与生物技术研究所,墨尔本大学,墨尔本,维多利亚,澳大利亚
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  • Nichollas E. Scott.
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    澳大利亚维多利亚州墨尔本彼得多尔蒂研究所的墨尔本大学微生物学与免疫学系
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  • 凯瑟琳帕尔默
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    生物化学与分子生物学与生物化学和生物学科学与生物技术研究所,墨尔本大学,墨尔本,维多利亚,澳大利亚
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  • 陈艾坤
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    澳大利亚维多利亚州墨尔本彼得多尔蒂研究所的墨尔本大学微生物学与免疫学系
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  • Hayley J. Newton.
    一致
    对于通信:Hayley J. Newton; Diana Stojanovski。
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    澳大利亚维多利亚州墨尔本彼得多尔蒂研究所的墨尔本大学微生物学与免疫学系
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  • Diana Stojanovski.
    一致
    对于通信:Hayley J. Newton; Diana Stojanovski。
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    生物化学与分子生物学与生物化学和生物学科学与生物技术研究所,墨尔本大学,墨尔本,维多利亚,澳大利亚
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开放访问发布:12月3日,2020年DOI://doi.org/10.1074/mcp.RA120.002370

      强调

      • 线粒体纯化和蛋白质组学研究宿主病原体相互作用。
      • 定量蛋白质组学揭示 Coxiella.. 效应蛋白 at mitochondria.
      • 在原生感染期间患有效应蛋白的见解。
      • MCEC的进一步表征揭示了本地化和相互作用。

      抽象的

      宿主细胞的调节与微生物的存活率和复制是一体的 病原体。几种细胞内细菌病原体递送细菌蛋白,称为 通过复杂的蛋白易位感染期间“效应蛋白”进入宿主细胞 系统,操纵蜂窝过程和功能。功能贡献 个体效果表征差,特别是在细胞内细菌中 具有大效应蛋白曲目的病原体。技术警告有限 在本地感染期间研究这些蛋白质的能力,具有许多效应器 刚刚证明蛋白质在过表达期间被证实 标记版本。在这里,我们开发了一种研究效应蛋白的新策略 在感染的背景下。我们耦合了一个广泛的基于非偏见的蛋白质组学的屏幕 有细胞石纯化,以研究在之间发生的宿主病原体相互作用 宿主细胞线粒体和革兰氏阴性,q发烧病原体 Coxiella..buretii。我们识别四个新型线粒体目标C. Burnetii.效应蛋白,更名为线粒体Coxiella.. 效应蛋白(MCE)B至E.检查斑块的亚细胞定位 表达蛋白质证实了它们的线粒体定位,证明了鲁棒性 我们的方法。随后的生化分析和亲和力富集蛋白质组学 其中一个效应蛋白,MCEC,揭示了蛋白质定位于内部 膜和可以与线粒体质量控制机械的组分相互作用。 我们的研究适应高敏感性蛋白质组学学习细胞内宿主病原体 交互,提供一种稳健的策略来检查亚细胞定位 效应蛋白在原生感染过程中。这种方法可以应用于一个 病原体和宿主细胞隔间的范围提供了丰富的效应动态图 整个感染。

      图形概要

      关键词

      缩写:

      AGC. (自动增益控制), IM小号 (内蒙琴空间), imm (内部线粒体膜), LFQ. (无标签定量), 迈克 (线粒体Coxiella效应蛋白), PK. (蛋白酶K.), PMSF. (氟甲基磺酰氟乙烯), T4SS (IV型分泌系统), TCA (三氯乙酸), 蒂姆 (内部线粒体膜的译式酶), THP-1细胞 (人单核细胞衍生的巨噬细胞线), 汤姆 (外部线粒体膜的译式酶)

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