蛋白质组学分析鉴定的肝细胞癌中的一种独特的自身抗体曲目*

      具有乙型肝炎(HBV)和丙型肝炎(HCV)病毒的慢性感染是肝细胞癌(HCC)的主要危险因素。我们利用蛋白质组学方法来确定是否可以在HCC中识别出无论是一种独特的自身抗体。研究了来自37例HCC和31名受试者的血清,慢性感染HBV或HCV没有HCC。来自116例其他癌症的血清,三名患有全身性狼疮红斑的患者和24名健康受试者被用作对照。我们报告了八种蛋白质的鉴定,每个蛋白质中的每个蛋白在血清中检测到来自超过10%的HCC患者但不在健康个体的血清中(p <0.05)。在慢性肝炎患者的血清中以可比频率检测到其中四种蛋白质中的四种蛋白质。另外四种蛋白质,由CaltreteLiN同种型,细胞角蛋白8,核苷二磷酸激酶A和F组成1-ATP合成酶β-亚基,诱导HCC患者患者的自身抗体,独立于其HBV / HCV状态。 Caltretitulin,以及我们已经鉴定过的CalreteLin(CRT32)的新型截短的形式,HCC患者中最常见的自身抗体(27%)。我们得出结论,一种独特的自身抗体与HCC有关,可能在慢性肝炎的高风险受试者中具有早期诊断HCC的效用。
      在人类中对癌症的免疫反应越来越多的证据,部分通过对肿瘤抗原的自身抗体进行了证明(
      • 储存器E.
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      人癌血清学的新途径。
      )。鉴定引发体液反应的肿瘤抗原面板可能在癌症筛查,诊断或建立预后具有效用。这种抗原也可能在免疫疗法中具有效用。目前有几种方法目前用于鉴定肿瘤抗原。我们已经实施了一种基于蛋白质组学的方法,用于鉴定诱导抗体反应的肿瘤抗原,我们已经应用于肝细胞癌(HCC),
      使用的缩写是:HCC,肝细胞癌; HBV,乙型肝炎病毒; HCV,丙型肝炎病毒; SLE,Systemic Lupus红斑狼疮; 2-D,二维; NDPKA,核苷磷酸激酶A; MALDI-TOF,矩阵辅助激光解吸电离 - 飞行时间。
      1使用的缩写是:HCC,肝细胞癌; HBV,乙型肝炎病毒; HCV,丙型肝炎病毒; SLE,Systemic Lupus红斑狼疮; 2-D,二维; NDPKA,核苷磷酸激酶A; MALDI-TOF,矩阵辅助激光解吸电离 - 飞行时间。
      全世界主要类型的癌症(
      • el-serag h.b.
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      美国肝细胞癌的发病率上升。
      )。
      HCC预后差,5年生存率低于5%。大多数HCC病例与肝硬化(美国和欧洲至少90%)有关(
      • Ikeda K.
      • SAITOH S.
      • Koida I.
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      肝细胞癌危险因素多元分析:795例病毒和酒精性肝硬化患者的前瞻性观察。
      )。具有乙型肝炎(HBV)和C(HCV)病毒的慢性感染是HCC的主要危险因素,并且慢性载体状态的发展是急性病毒感染后最常见的事件(
      • Bréchotc.
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      )。 HCC发病率上升的最可能解释是肝炎病毒在人口中的传播。已显示在HCC中诱导体液反应的抗原包括P53(
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      具有肝细胞癌抗体鉴定的新型核自身抗原与肝细胞癌抗体鉴定。
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      含有WD-40基序的细胞周期核自身抗原,主要表达于S和G.2 phase cells.
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      在原发性肝癌中自身抗体到DNA拓扑异构酶II。
      )。 Cyclin B1的自身抗体(
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      对肝细胞癌细胞周期蛋白B1的免疫反应。
      )和具有RNA结合基序的新型细胞质蛋白(
      • 张俊。
      • 陈娥。
      • 彭X.X.
      • 晒黑
      具有RNA结合基序的新型细胞质蛋白是人肝细胞癌中的自身抗原。
      )也已经报道。一个serex(重组cDNA的灭绝分析 前任 肝细胞癌的压力文库研究了与转录/翻译机械的不同蛋白质的反应性,以及伴侣蛋白(
      • Stenner-liewen F.
      • Sahin U.
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      • Koslovski M.
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      肝细胞癌肿瘤相关抗原的定义。
      )。
      相反,基于重组蛋白的分析,我们使用的蛋白质组学方法允许鉴定来自由肿瘤和肿瘤细胞系中制备的裂解物中的蛋白质鉴定蛋白质,因此可以更容易地揭开与后相关的抗原性。翻译修改。我们报告了鉴定八种蛋白质,其在HCC患者中引起了体液反应,但不在健康个体中,根据我们对37例HCC患者和额外的控制。在这八种蛋白质中,发现截断形式的CaltreteLIN CRT32通常诱导肝细胞癌中的自身抗体。 CRT32自身抗体在很大程度上仅限于HCC。

      实验步骤

       血清,肿瘤组织和细胞系 -

      在诊断到37例HCC患者时获得血清, 遵循知情同意。该组由30名男性和七个女性组成,年龄范围为20至86(平均值= 59岁)。 37例患者的临床特征 表I.。通过将HBsAg和抗HCV Plus PCR组合用于HBV DNA和HCV RNA来确定HBV和HCV状态。来自其他癌症的116名患者,由24例患有乳腺癌,52例,肺癌,16名脑肿瘤,7名与黑色素瘤,17例,来自31名受试者,从3例感染HBV或HCV的31名受试者,来自3例患者含有活跃的全身性狼疮(SLE)和24个健康个体,用作对照。从HCC患者获得肿瘤和非肿瘤对应组织。切除后,将组织立即冷冻于-80℃。人肝癌细胞系PLC-PRF5和HUH7在Dulbecco的改性鹰培养基中培养,其补充有10%胎牛血清,100个单位/ ml青霉素和100个单位/ mL链霉素(Invitrogen)。
      T有能力的 IHCC受试者的特征
      耐心性别年龄肝硬化HBV.HCV.
      1F70
      2M76
      3M69
      4M39
      5M41
      6M54
      7F57+
      8M56+
      9M60+
      10M86+
      11F71+
      12M58+
      13M44+
      14F71+
      15M20+
      16M86+
      17M33+
      18F69+
      19M73++
      20M58++
      21M59++
      22M60++
      23M35++
      24M59++
      25F57++
      26M61++
      27M64++
      28F55+++
      29M64+++
      30M60+++
      31M53+++
      32M67+++
      33M65+++
      34M62+++
      35M55++
      36M55++
      37M73

       二维聚丙烯酰胺凝胶电泳(2-D页) -

      遵循的程序如前所述(
      • Strahler J.R.
      • Kuick R.
      • 汉尚三
      )。在含有9.5的裂解缓冲液中溶解培养的细胞和肿瘤和非肿瘤组织 m 尿素(Bio-rad),2%Nonidet p-40,2%载体两种,pH 4-8(Gallard / Schlessinger,Carle Place,Ny),2%β-巯基乙醇和10米m 苯甲磺酰氟乙烯。用Bradford测定(Bio-rad)测量蛋白质浓度。将蛋白质(175μg)施加到异质凝胶上。使用pH 4至8载体两种在700V下进行16小时,然后再为1000V进行等电聚焦,另外2小时。在125米的平衡后,将第一尺寸凝胶装载到第二尺寸凝胶上m TRIS,pH 6.8,10%甘油,2%SDS,1%二硫醇和溴酚蓝。对于第二尺寸分离,使用11至14%丙烯酰胺(Serva; Crescent Computic,Hauppauge,NY)的梯度。将蛋白质转移到Imobilon-P聚偏二氟乙烯膜(Millipore,Bedford,MA)中或通过凝胶的银染色可视化。使用柯达CCD相机,在1024×1024-像素分辨率下数字化银染色的凝胶。当指示时,用读数软件(基因组溶液,ANN ANROR,MI)检测和量化斑点(
      • Kuick R.D.
      • Skolnick m.m.
      • 汉尚三
      • Neel J.v.
      二维电泳相关实验室信息处理系统:现场匹配。
      )。

       Western Blotting-

      转移后,将膜孵育2小时,在10米的含有5%牛奶的封闭缓冲液中孵育2小时m Tris-HCl,pH 7.5,2.5米m EDTA, pH 8, 50 mm NACL。将膜与患者或对照(1:300稀释)一起获得的血清孵育2小时。三次洗涤后,将膜与辣根过氧化物酶 - 缀合的抗人IgG抗体(1:1000稀释)温育(Amersham Biosciences)。通过增强化学发光(ECL; Amersham Biosciences)来完成免疫缩乳,然后通过血汗素(Amersham Biosciences)进行放射自显影。通过使用针对钙霉素,SPA-600(Resengegen,Victoria,Canada)和T-19(Santa Cruz Biotechnology,Santa Cruz,CA)的抗体进行抗体进行钙霉素检测的免疫印迹测定以1,000,000和1:分别为10,000。然后将膜用辣根过氧化物酶 - 缀合的抗兔(Amersham Biosciences)或抗山羊(Sigma)IgG抗体孵育1小时,以1:1000稀释。

       凝胶酶消化和质谱 -

      通过在0.02%硫代硫酸钠的连续孵育2分钟,0.1%硝酸盐40分钟,0.014%甲醛加2%碳酸钠,2-D凝胶。感兴趣的蛋白质从2-D凝胶中切除并在15米中抵抗5分钟m 铁氰化钾和50米m 硫代硫酸钠如描述(
      • Gharahdaghi F.
      • Weinberg C.R.
      • Meagher D.a.
      • Imai B.S.
      • 误解了
      银染料聚丙烯酰胺凝胶中蛋白质的质谱鉴定:一种除去银离子以增强敏感性的方法。
      )。在用水三次洗涤后,将凝胶片在100%乙腈中脱水5分钟,并在真空离心机中干燥30分钟。在200米中加入100 ng胰蛋白酶(Promega,Madison,Wi)进行消化m 碳酸氢铵。在37℃下酶消化过夜后,用50μl60%乙腈/ 1%三氟乙酸萃取肽两次。通过在真空离心机中离心除去乙腈后,使用移液管C18(Millipore,Bedford,MA)浓缩肽。分析主要是使用延肽生物系统矩阵辅助激光解吸电离 - 飞行时间(MALDI-TOF)Voyager-DE质谱仪(Framingham,MA),在延迟提取模式下操作。使用含有1%三氟乙酸(Sigma)的丙酮的α-氰基-4-羟基氨基酸(Sigma)的饱和溶液分析肽混合物。在800-4000Da的质量范围内选择肽。使用杂唑肽质量标准试剂盒(潜水生物系统,Framingham,MA)的校准混合物2校准光谱。搜索程序MS-FIT,由加州大学在旧金山(Prospector.ucsf.edu),用于在NCBI数据库中搜索。搜索参数如下:400 ppm的最大允许肽质量误差,考虑每种肽的一个不完全切割,并且在4到8之间的PI范围。

      结果

       HCC-患者血清中自身抗体的发生

      最初使用两种肝癌细胞系作为抗原来源研究来自HCC患者的血清中的自身抗体存在。从两种细胞系(PLC-PRF5和HUH7)中提取的蛋白质分别进行2-D页,并转移到Immobilon-P膜上。最初,来自37例HCC患者的血清(见 表I.)通过蛋白质印迹分析单独筛选24个健康的受试者,其中将每种血清与一个印迹与PLC-PRF5和单独的HUH7蛋白质一起孵育。使用二次抗IgG抗体来检测反应性蛋白质。通常,用来自HCC患者的血清检测更多的反应性蛋白质而不是对照血清(Fig. 1)。蛋白质表现出与HCC患者血清的选择性反应性(p <0.05)靶向进一步表征。该组由13个蛋白质斑点组成,其表现出与至少四(11%)的HCC Sera(11%)的反应性(表二)。 Fig. 2 显示HUH7和PLC-PRF5细胞2-D模式中的13个蛋白斑点的位置。在13个蛋白质中,PLC-PRF5和HUH7细胞系含有八种。仅在PLC-PRF5和仅在HUH7提取物中观察到两种反应性蛋白质,反映了两种细胞系之间蛋白质表达谱的差异。在所有情况下,如果在银染色的2-D图案中检测,则在一种细胞系中对一个细胞系中的蛋白质反应的血清也与其他细胞系中的相同蛋白质反应。总共37个HCC血清(73%)中的27例显示对13个蛋白中的至少一种的反应性,37例血清(46%)中的17个蛋白(46%)显示对13个蛋白中的至少两种蛋白质的反应性。
      图缩略图GR1.
      Fig. 1HCC患者血清中自身抗体的检测。 来自肝癌细胞系PLC-PRF5的蛋白质​​通过2-D电泳分离,随后染色(a)或转移在聚偏二氟乙烯膜上,用于使用来自健康个体的血清的蛋白质印迹实验(b)或来自两名HCC患者(cd)作为第一抗体。
      T有能力的 II反应蛋白的鉴定
      复发(%)鉴别加入号码匹配肽(%)涵盖的蛋白质%
      127Caltretitulin.47579007/13(53%)23
      227Caltretitulin.47579004/6(66%)14
      311n
      424β-小管蛋白21192766/6(100%)18
      527Caltretitulin.475790010/13(76%)31
      614hsp6012937915/28(53%)42
      714Cytokeratin 18.45578885/9(55%)11
      811Cytokeratin 8.8730316/22(72%)38
      914肌酸激酶-B18057014/24(58%)43
      1011F1-ATP合成酶β亚基11454918/45(40%)39
      1114n
      1227Crt3247579004/6(66%)19
      1314ndpka.350686/11(54%)34
      图缩略图GR2.
      Fig. 2反应蛋白斑点的位置。 来自肝癌细胞系Huh7的总蛋白质(左侧面板)和PLC-PRF5(右侧小组)用2-D电泳和银染色分离。 13个选定的反应性蛋白斑点的位置标记在2-D图案上。

       鉴定反应蛋白 -

      对于蛋白质鉴定,用HUH7和PLC-PRF5裂解物生产另外的2-D凝胶,并如“实验程序”下所述银染。然后从凝胶中切除13个感兴趣的蛋白质,用胰蛋白酶消化,随后通过MALDI-TOF质谱法分析。使用MS-FIT搜索程序,使用得到的光谱来鉴定蛋白质。从凝胶中切除的13个点中,鉴定了11个( 表二)。鉴定的蛋白质是由伴侣(HSP60和Caltritetulin),结构蛋白(细胞角蛋白8,细胞角蛋白18和β-微管蛋白)组成的不同组的成员,以及酶(肌酸激酶-B,F. 1-ATP合成酶β-亚基,核苷磷酸激酶A(NDPKA))。鉴定估计分子量12的点12中的蛋白质为32kDa和4.1的PI,用质谱法对应于CaltreteLin同种型。 CaltreteLIN是一种蛋白质,其分子量为48kDa和4.3的pi。我们最近在树突状细胞中鉴定并表征了一种截短形式的CaltriteteLin,其分子量为32kDa,我们指定了CRT32(
      • Le naour f.
      • Hohenkirk L.
      • 格鲁勒阿。
      • Misek D.E.
      • 莱斯库尔P.
      • 莱格尔J.D.
      • 汉尚S.
      • Beretta L.
      使用寡核苷酸微阵列和蛋白质组学分解单核细胞衍生的树突细胞的分化和成熟期间基因表达的分析变化。
      )。为了确认点12作为CRT32的标识,进行了额外的酶消化,并通过电喷雾电离质谱法进一步分析了表现出高强度的肽,得到氨基酸序列信息。结果,结果表明,点12中的蛋白质代表了与CRT32相同的CaltreteRIn蛋白的截短形式,并对应于C末端(氨基酸157-400)(图3A)。通过使用针对C-末端和N-末端肽产生的两种特异性抗体,通过蛋白质印迹进一步通过Western Blotting来鉴定点12中蛋白质的鉴定。分别。蛋白质点与SPA-600抗体反应,但不与T-19抗体(图3B.)。这些抗体还证实了斑点1,2和5的识别,如其他Calleteticulin同种型(图3B.)。 Calreteticulin蛋白,包括CRT32,来自HCC患者的血清中的自身抗体(27%)的最高频率。
      图缩略图GR3.
      Fig. 3识别CRT32。A,全长和Calretitulin的全长和CRT32片段的示意图。 CaltreteRIn素分为三个域,N-结构域,P域,伴侣活性的部位,以及含有kdel内质网检索信号的C结构域。蛋白质含有由a表示的n末端信号序列(17个氨基酸) 黑盒子. B,来自PLC-PRF5细胞的银染色的2-D凝胶的特写件部分,以及使用针对CaltreteLiN C末端和N末端区域的特异性抗体Spa-600和T-19的蛋白质印迹。

       对慢性肝炎患者鉴定蛋白质的自身抗体的频率 -

      对钙霉素,β-微管蛋白,细胞角蛋白8,肌酸激酶-B,F的自身抗体1-ATP合成酶β-亚基,并在来自HBV和/或HCV感染的HCC患者的血清中检测到NDPKA。相比之下,仅在HCC HBV和/或HCV感染的HBV患者的血清中检测到HSP60自身抗体,并且仅在HBV感染的HBV患者的血清中检测到细胞角蛋白18的自身抗体。为了确定某些自身抗体和肝炎病毒感染之间的关联,我们研究了来自31种受感染HBV或HCV(分别)的受试者的血清的自身抗体的发生并显示慢性肝炎,但没有HCC。反对CaltreteLIN蛋白,细胞角蛋白8,F的反应性 1-ATP合酶β-亚基,分别在2,1,1和0个受试者中观察到NDPKA( 表III),频率低于HCC患者。在慢性肝炎受试者和HCC患者的可比频率下观察对β-微管蛋白,肌酸激酶-B,HSP60和细胞角蛋白18的反应性(表III)。值得注意地,对细胞角蛋白18的反应性仅限于感染HBV的受试者,有或没有HCC。
      T有能力的 III在HCC患者和慢性HBV或HCV载体中,八个蛋白中的每一个发生自身抗体的发生
      主题Calretetetitetlin CRT32β-小管蛋白Hsp60Cytokeratin 18.Cytokeratin 8.肌酸激酶B.F1-ATP合成酶β亚基ndpka.
      HCC患者
       HBV+ (n = 24)67352424
       HCV+ (n = 9)14221202
       HBV HCV (n = 11)41002121
       Total (n = 37)109554545
      没有HCC的慢性载体
       HBV+ (n = 21)25750110
       HCV+ (n = 10)00301200
       Total (n = 31)251051310

       Calretitulin和CRT32在HCC-中的CrT32自身抗体的特异性

      CalreteteLin已被证明是某些自身免疫性疾病(如SLE)的抗原性(
      • Eggleton P.
      • 沃德F.J.
      • 约翰逊S.
      • khamashta m.a.
      • 休斯G.R.
      • Hajela V.A.
      • 迈克拉克M.
      • Corbett e.f.
      • 污渍N.A.
      • Reid K.B.
      对钙霉素的自身抗体细异性:表位测绘和表征。
      )。引起液体反应的表位已经位于分子的N-末端部分(
      • Eggleton P.
      • 沃德F.J.
      • 约翰逊S.
      • khamashta m.a.
      • 休斯G.R.
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      • 迈克拉克M.
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      对钙霉素的自身抗体细异性:表位测绘和表征。
      )。因此,我们将自身反应与来自HCC患者的血清之间的不同形式的Caltretitulin与来自活性SLE的三名患者的血清相比。有趣的是,在SLE患者中观察到对全长钙素而不是CRT32的反应性(Fig. 4),表明表位的差异诱导HCC和SLE中的自动反应性。
      图缩略图GR4.
      Fig. 4Caltretitetlin在SLE患者中的自身抗体。 蛋白质印迹的特写件部分,在总PLC-PRF5蛋白提取物的二维电泳之后,使用HCC或SLE患者的血清。全长CalreteLIN和CRT32的不同同种型由A表示 黑线, 分别。
      针对CaltreteLIN和CRT32的自身抗体主要限于我们分析的不同癌症血清中的肝癌患者(表IV.)。 CRT32在24例乳腺癌患者中的两种血清中发现了CRT32,并在52例肺癌患者中有两种患者。没有16例脑肿瘤患者的血清,七位与黑色素瘤,17例,具有食管癌的17例,表现出对钙蛋白蛋白的自身抗体。
      T有能力的 IVCRT32自身抗体在其他癌症中的频率
      癌症阳性/总血清
      胸部2/24
      2/52
      0/16
      黑色瘤0/7
      食管0/17

       CRT32肝脏肿瘤中的表达 -

      鉴于对CRT32的自身抗体的发生仅限于HCC患者,我们检查了肝脏肿瘤中的CRT32表达和从HCC的五名患者获得的邻近的非肿瘤组织。使用计算机化的定量方法,通过2-D页和银染量测量CRT32水平。有趣的是,肿瘤中的CRT32水平相对于非肿瘤对应组织(3.9±1.3倍;平均值±S.E.)(Fig. 5)。
      图缩略图GR5.
      Fig. 5CRT32在肝肿瘤组织中的表达。A,从患有HCC患者获得的肿瘤组织和非肿瘤对应物的银染色2-D凝胶的特写件部分。 B,在数字化之后从银染色的2-D凝胶中定量CRT32表达水平。

      讨论

      我们利用HCC患者诱导肿瘤蛋白诱导肿瘤蛋白质的蛋白质组学方法已经确定了一种多样化的抗原,患者之间具有实质性的异质性。我们确定了八种蛋白质,其中血清中的体液反应从37名患者中的70%引发了血清,其各个蛋白质的频率为11%至27%。在慢性感染HBV和/或HCV的受试者的血清中,还观察到对β-微管蛋白,肌酸激酶-B,HSP60和细胞角蛋白18的发生自身抗体的发生,而针对Caltretitulin,Cytokeratin 8,F的自身抗体1-ATP合成酶β-亚基,并且NDPKA在很大程度上限于HCC患者。我们鉴定的八种抗原蛋白中的一些以前在各种条件下用自身抗体相关联。有趣的是,蛋白质f1-ATP合酶β-亚基以前报道了HCC患者的抗原,通过Serex(
      • Stenner-liewen F.
      • Sahin U.
      • Tareci O.
      • Koslovski M.
      • Kautz I.
      • Liewen H.
      • Pfreundschuh M.
      肝细胞癌肿瘤相关抗原的定义。
      )。 HCC患者的三种反应性蛋白质我们已经鉴定出代表的细胞骨架蛋白,即β-微管蛋白和细胞角蛋白8和18.之前在神经分区肿瘤患者的血清中发现了抗微管蛋白自身抗体(
      • Prasannan L.
      • Misek D.E.
      • 阻碍R.
      • Michon J.
      • 莱格尔J.D.
      • 汉尚三
      鉴定β-小蛋白同种型作为神经母细胞瘤中的肿瘤抗原。
      ),获得的脱髓鞘多肠病(
      • 康诺利地
      • Pestronk A.
      抗微管蛋白自身抗体中获得的脱髓鞘多种多元化。
      )和sle(
      • cullum n.a.
      • 科尔曼J.W.
      • Casson i.f.
      • 麦克莱恩W.G.
      对微管蛋白和微管相关蛋白的抗体。糖尿病糖尿病,全身狼疮红斑和类风湿性关节炎的研究。
      ,
      • Yazici Z.A.
      • Behrendt M.
      • Cooper D.
      • Goodfield M.
      • 鹧L.
      • Lindsey N.J.
      内皮细胞自身抗原的鉴定。
      )。循环抗细胞角蛋白8抗体免疫复合物在肺纤维化患者的血清中报道(
      • Dobashi N.
      • 藤池J.
      • ohtsuki Y.
      • Yamadori I.
      • Yoshinouchi T.
      • Kamei T.
      • Tokuda M.
      • Hojo S.
      • Bandou S.
      • Ueda Y.
      • Takahara J.
      循环细胞角蛋白8:抗细胞角蛋白8抗体免疫复合物在肺纤维化患者血清中。
      )。患有胃癌患者的血清中观察到针对细胞角蛋白18的自身抗体的存在(
      • ab
      • Fukumoto M.
      • Tsuchiya K.
      • Kuramochi K.
      • Furuta T.
      • 多哥S.
      • Nishiyama K.
      • Tsuchiya S.
      针对胃癌患者产生的细胞角蛋白18的人单克隆抗体。
      )。有趣的是,表达突变形式的细胞角蛋白18的转基因小鼠在肝细胞角蛋白的破坏中发育慢性肝炎(
      • ku n.o.
      • Michie S.
      • 伊莎丽亚r.g.
      • Omary M.B.
      慢性肝炎,肝细胞脆性和增加的转基因小鼠中的可溶性磷酸盐酸,表达角蛋白18保守的精氨酸突变体。
      )。在人类中,有人建议细胞核酸素18缺陷易于隐生肝硬化(
      • ku n.o.
      • 赖特T.L.
      • Terrault N.A.
      • GISH R.
      • Omary M.B.
      人角蛋白18与隐生肝硬化结合的突变。
      ),在肝癌中肿瘤转化期间报道了细胞角蛋白18表达的改变(
      • 刘Y.H.
      • pei r.j.
      • Yeh C.C.
      • 李克。
      • yeh k.t.
      • Hsu Y.H.
      • HO C.C.
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      肝癌肿瘤转化过程中细胞核酸素18分子及其mRNA表达的改变。
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      • Hsu Y.H.
      • HO C.C.
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      • 赖Y.
      与肝癌相比,细胞角蛋白18在过渡细胞癌中的表达。
      )。针对HSP60的患者在莱姆病或类风湿性关节炎患者的血清中报道了对HSP60的自身抗体(
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      特异性免疫作为自身免疫性关节炎控制的关键因素:HSP60作为辅助和保护性自身的例子。
      ),以及患有骨肉瘤的患者(
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      血清抗热蛋白60的血清抗体在骨肉瘤患者中升高。
      )。
      我们使用的蛋白质组学方法允许鉴定鉴定多种形式的CalreteRIN,包括CRT32,一种新型截短的形式,所有这些都被HCC患者血清中的自身抗体认可。蛋白质钙霉素已被鉴定为各种风湿性疾病中的自身抗原,例如类风湿性关节炎,SLE,Sjögren综合征,乳糜泻,先天性心脏块和结缔组织疾病(
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      对钙霉素的自身抗体细异性:表位测绘和表征。
      )。然而,据报道,据报道,据报道,诱因具有自身免疫性疾病患者的体液反应的表位位于本分子的N-末端部分,而在我们的研究中引起HCC患者的体液反应的表位位于C末端部分。这表明肝癌发生期间的CaltreteLin加工机制。 CaltreteRIn素是主要组织相容性复合物类I肽加载复合物的组成部分(
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      ),最近据报道,CaltreteLIN引发肿瘤和肽特异性免疫(
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      Caltretemulin,内质网的肽结合伴侣,引发肿瘤和肽特异性免疫。
      )。据报道,钙霉素在肝细胞癌的核基质分数中浓郁,但不含非正常性肝组织(
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      )。我们已经表明,与非肿瘤对应物相比,CRT32在HCC肿瘤组织中上调。这种CRT32的过度表达可能有助于对肝癌患者的钙霉素和CRT32观察到的体液反应。
      我们使用的蛋白质组学方法已经未发现一种不同的自身抗体,其特征在于HCC中的体液反应。检测针对HCC相关抗原的自身抗体的检测可以具有HCC筛选,诊断或随访的价值。 HCC特别高风险的受试者是慢性HBV和HCV载体。鉴定与HCC的发展相关的自身抗体将在监测这种高风险组方面具有实质性效用。另外,HCC中肿瘤相关抗原的鉴定也可能在抗原的免疫疗法中具有效用。

      致谢

      我们感谢Melissa Krause,Robert Hinderer以及Eric Puravs的技术援助。

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