大规模的间接性研究开发,分析验证和应用高度复用,定量肽测定,以测量血浆中的癌症相关蛋白质*

      生物学和临床医学的需求越来越多地,以强大可靠地 在临床和生物样品中测量数百份肽和蛋白质 具有高灵敏度,特异性,重复性和可重复性。之前, 我们证明,具有同位素稀释的LC-MRM-MS具有适当的性能 人类中少量相对丰富的蛋白质的定量测量 等离子体,并可在实验室中转移所产生的测定 保持高再现性和定量精度。在这里,我们显着 延长了早期的工作,展示了使用14 LC-MS系统的11个实验室 可以开发,确定分析的优点,并应用高度多路复用的MRM-MS 靶向衍生自27例癌症相关蛋白质和七种控制的125个肽的测定 蛋白质精确且可重复地测量人血浆中的分析物。确保 一致的高质量数据,我们纳入了一个系统适用性协议 (SSP)进入我们的实验设计。 SSP使能LC-MRM-MS的实时监控 在分析开发和实施过程中的表现,促进早期检测 和矫正色谱和仪器问题。低到亚网图/ ml 通过单步免疫亲和性耗竭实现血浆中蛋白质的敏感性 在分析之前14个丰富的血浆蛋白。中位数和互上的 reproducibility was <20%,足以用于大多数生物学研究和候选蛋白 生物标记验证。评估肽的消化回收率和定量 准确性使用重型同位素标记版本的蛋白质改善 标准。使用高度多路复用的测定,参与实验室能够 精确且可重复地确定蒙蔽中一系列分析物的水平 用于模拟患者样品的临床临床研究的样本。我们的 研究进一步建立了使用稳定同位素稀释的LC-MRM-MS,适当 注意分析验证和适当的质量控制措施,使能 蛋白质和肽的敏感,特异性,可重复和定量测量和定量测量 在复杂的生物学基质如等离子体中。

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