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海报会议B.

        B.1
        邻近标记方法的研制鉴定生物活性小分子的彩易福彩靶标
        扎卡里山 ,闵庄,詹姆斯井
        加利福尼亚大学,旧金山,加州,美国
        鉴定生物活性小分子的直接蛋白靶靶靶向化合物的作用机制,其疗效和可能的毒性。目标识别正成为药物开发过程的越来越重要的部分。然而,鉴于小分子和彩易福彩之间的相互作用的瞬态和异质性质,这一步骤通常很困难,大大放缓了新治疗剂的发展。因此,快速鉴定生物活性小分子的直接蛋白靶标的新方法具有重要意义。与定量质谱相结合的富集策略在目标识别中显示出很大的希望。在这里,我们将展示我们在开发一种工程化酶标标记方法的进展,这使得能够从复合裂解物中进行特异性标记和富集彩易福彩靶标。该方法将小分子的结合耦合到基于接近的标记事件。使用定量LC-MS / MS富集标记的靶蛋白并随后鉴定。我们将讨论这种方法的几种变体,并突出了我们在将邻近标记应用于小分子目标识别和验证的进展。
        B.2
        型动脉粥样硬化造型:胆固醇喂养兔升主动脉的分子变化
        京湖徐 1,2 ,MiaJüllig 1,2,Martin J. Middleditch1,2,Garth J.s.库珀 1,2,3,4.
        1新西兰奥克兰大学生物科学学院; 2莫里斯威尔金斯分子生物消泡中心,奥克兰大学奥克兰大学,新西兰; 3英国牛津大学牛津大学医学科医学科医学科; 4高级发现和实验治疗中心,NIHR曼彻斯特生物医学研究中心,曼彻斯特大学,英国曼彻斯特
        胆固醇喂养的兔通常用于研究高胆固醇症和相关动脉粥样硬化病变的影响。在这里,我们在含有2%(w / w)胆固醇(HC饮食)的饮食中维持新西兰白兔12周,之后切除升高的主动脉并进行彩易福彩组学分析。
        从十个单独获得的升高的主动脉样品用等异(ITRAQ)标签标记,并通过LC-MS / MS分析,以依赖于HC饮食(N = 5)与非HC,标准饮食相比响应彩易福彩组学变化( n = 5)。彩易福彩蛋白用于搜索对NCBI兔蛋白序列数据库的LC-MS / MS输出,导致鉴定453个独特的彩易福彩。其中,74显示了相对丰度的显着差异(P<0.05),69例彩易福彩高,从HC饮食兔的升序中升高5个蛋白,与对照相比。
        许多观察到的彩易福彩变化与升性主动脉内的分子扰动一致,响应于兔子中的HC饮食,例如,例如兔子饮食。载脂蛋白的升高,细胞外基质粘附蛋白,胶粘剂,糖酵解酶,热休克蛋白,参与免疫防御的彩易福彩,以及调节肌动蛋白的聚合物状态的彩易福彩。
        我们还制造了许多新颖的观察结果,包括以前与血管生成相连但不是动脉粥样硬化的彩易福彩的极端(16倍)升高。来自HC喂养兔的升高的主动脉也有许多其他与动脉粥样硬化相关的彩易福彩。这些新颖的观察结果将进一步调查,因为这些扰动可能在动脉粥样硬化的发病机制中发挥重要且尚未发现的作用。
        B.3
        翻译后修改网络
        Vera Van Noort.
        Katholieke Universiteit Leuven,Leuven,比利时
        彩易福彩翻译后修饰(PTMS)允许细胞调节彩易福彩活性,并在对外部条件或内部状态的变化的反应中发挥至关重要的作用。质谱进展现在现在使彩易福彩组具有较宽的PTMS表征,并且揭示了一系列不同类型的修饰(1)的广泛功能作用。我们系统地研究了彩易福彩磷酸化与基因组减少的细菌支原体肺炎(2)中的转录后调节机制的相互作用。通过缺失其仅两种蛋白激酶和其独特的彩易福彩磷酸酶的系统扰动不仅鉴定了对磷酸化网络的彩易福彩特异性影响,而且鉴定了彩易福彩组丰度和赖氨酸乙酰化模式的调节,主要是在没有转录变化的情况下。相互作用,两种推定的N-乙酰基转移酶的缺失影响彩易福彩磷酸化,确认两种PTM之间的交叉谈话。测得的M.肺蛋白酶和赖氨酸乙酰胺显示,两种PTMS非常常见,(如在真核生物中),它们通常在相同的彩易福彩内共发生,并且它们经常在相互作用界面和彩易福彩中观察它们的彩易福彩中的一部分彩易福彩复合物(3)。结果意味着先前未报告的隐藏层的后转录后调节与赖氨酸乙酰化和定义细胞功能状态的其他机制的磷酸化层。针对PTM类型之间的相互作用的更全面的视图,我们在8个真核续中收集了13种频繁PTM类型的修饰,比较了它们的进化速度,并开发了一种基于站点的共同发生彩易福彩中的PTM共同输出的方法跨越真核生物(4)。我们发现PTM类型大大互连,形成一个包括在人类中的全球网络>大约6000个彩易福彩中的50,000个残留物。
        1. Beltrau P,Bork P,Krogan NJ,Van Noort V.彩易福彩翻译后修改的演化和功能串扰。 MOL SYST BIOL 9,714。(2013)
        2. van noort v,Seebacher J,Bader S,Mohammed S,Vonkova I,Betts MJ,Kühners,Kumar R,Maier T等人。基因组减少细菌中磷酸化与赖氨酸乙酰化之间的串扰。 MOL SYST BIOL 8,571.(2012)
        3.Kühners*,van Noort V *,Etal。彩易福彩组组织在基因组减少的细菌科学326,1235-1240中。 (2009)
        4. Minguez P,Parca L,Etal。解密功能相关的翻译后修改的全局网络。 MOL SYST BIOL 8,599。(2012)
        B.4
        细胞外磷酸化在鼠突触体中
        Jonathan C Trinidad.1,Ralf Schoepfer2,alma l burlingame3,Katalin F Medzihradszky3*
        1印第安纳大学化学系,布卢明顿,美国; 2英国英格兰大学学院药理科; 3美国加利福尼亚州旧金山大学药房药学化学系
        翻译后修饰(PTMS)在彩易福彩的细胞定位和/或生物学功能中起关键调节作用。彩易福彩内的修饰位点;他们的固定或瞬态的性质;修改之间的化学计量和潜在的串扰是众多大规模研究的重点。该研究的大部分都集中在细胞内方法中涉及的PTM,例如磷酸化,甲基化,GlcNacylation,乙酰化和泛素化。其中,由于这种修改的生物重要性以及该研究的工具可用性,磷酸化是最多的研究。
        虽然大多数彩易福彩磷酸化发生在细胞内蛋白上,但分泌彩易福彩的磷酸化很好地建立。详细的实例包括分泌的乳蛋白,β-酪蛋白和血清蛋白胎素。我们目前对细胞外磷酸化的生物学作用的理解,以及关于它们被修饰的过程的知识是不完整的。已经鉴定了称为FAM20的激酶并局限于GOLGI以及分泌物。已经显示出用SXE基序磷酸化细胞外蛋白。
        我们最近对细胞内磷酸化和谷氨酸蛋白与鼠突触体分离的彩易福彩之间的相互作用进行了广泛的研究。该数据还允许我们识别超过500种分泌或跨膜蛋白的特定聚糖结构。随后我们检查了在我们的样品中存在磷酸化的程度,这些程度在于跨膜蛋白的分泌彩易福彩或细胞外区域的样品中存在磷酸化。我们的目标是确定这种磷酸化可以通过Golgi族激酶的已知基序解释的程度。
        我们分析了细胞外磷酸化位点周围的序列,以及糖基化和磷酸化残基之间的线性氨基酸序列的空间关系。
        这项工作得到了NIH Grant Nigms 8P41GM103481的支持,并由Howard Hughes Medical Institute得到支持。
        B.5
        使用选择性反应监测(SRM)质谱法向揭示调节反馈回路控制脂肪发生
        罗伯特Ahrends.1,2 ,Asuka Ota 2,Kyle M. Kovary2,Takamasa Kudo.2,Byung Ouk Park2,玛丽N.特鲁埃尔2
        1米斯,多特蒙德,德国; 2临床和系统生物学,斯坦福大学,斯坦福大学,美国
        背景:由于现代生活方式的变化,肥胖对人类健康有所影响。肥胖疫情现在被认为是当今世界面临的最重要的公共卫生问题之一。了解adipoonesis对于了解肥胖至关重要;表现出脂肪发生的失败是糖尿病发展的关键因素。
        在使用单细胞成像之前的早期工作中,我们证明在脂肪发生的时间过程中存在明显的决定。从而分化网络中PPARG和其他转录因子(TFS)之间的正反馈回路正在调节该决定。我们鉴定了PPARG和C / EBPB之间的正反馈环,在调节脂肪发生方面发挥着关键作用。由于具有不同时序和强度的多个反馈循环可以锐化决策过程并控制差异的小区数,我们希望更好地了解决策过程中有多少其他彩易福彩。
        目的:这项工作的目的是寻找能够在承诺决定中发挥关键作用的反馈循环。
        方法:使用所选反应监测(SRM)质谱法与扰动联合,我们分析了OP9细胞以检测可用作探针的TFS的肽。我们通过同位素编码的内肽标准验证了这些探针,并建立了转录关键调节因子的SRM库。随后使用这些探针定量突破脂肪发生的不同阶段,以获得不同TFS的时间课程。为了实现我们更详细的阐明TF控制网络的主要目标,我们还搜索了这种差异化系统中的隐藏反馈循环。为此,我们可以单独化学操纵PPARG的活动水平及其潜在的反馈合作伙伴。如果彩易福彩是一个或多个反馈回路的组分并且进行了实验操纵,则与该彩易福彩相关的反馈回路的所有其他组分应显示丰度的相对变化,反之亦然。
        结果:我们开发了一种SRM方法,以监测脂肪发生过程中TFS的浓度变化。使用此SRM方法在一起PPARG的扰动,以及我们能够验证已知的反馈循环(C / EBPA,C / EBPB)并识别几个新的反馈循环。
        结论:PPARG是脂肪生成的司体调节因子。为了成功地将前脂肪细胞分化为脂肪细胞,其活动需要通过反馈回路网络紧密调节。总体而言,该研究提供了一种新的SRM基于SRM MS的方法来揭示调节TFS的新型反馈回路。基于这种方法;我们已经确定了7种新的彩易福彩,这是PPARG的基本调节因素和脂肪细胞承诺决定。
        B.6
        定量和功能性磷蛋白酶在乙烯信号研究中的应用
        1
        1香港科技大学,香港,中国
        乙烯是一种主要植物激素,调节植物生长和发展的多种方面。乙烯在植物中的调节作用包括促进叶子和花瓣衰老,泛黄和脱落,以及促进果实脱落和成熟。该关键激素还参与了许多植物生物和非生物应激反应的调节。乙烯对热带反应的巨大作用是乙烯对茎负性重力应答的双反对效应,其中短期乙烯处理(0.5小时)似乎在拟南芥的次曲调之后抑制茎弯曲。相比之下,长期治疗(12小时)刺激重力反应,促进茎曲线更快。这种时间依赖性和互相独立的乙烯对茎颅脂的相反效应可能涉及多个信号通路。在EIN2-5,CTR1-1和RCN1-1乙烯信号传导突变体中进行的稳定同位素代谢标记的定量磷蛋白酶确实证实了时间依赖性彩易福彩磷酸化变化,一些磷酸化事件与eIN2丧失响应的函数丧失基因无关乙烯处理。磷酸化转录因子ERF110同种型的功能研究表明,需要通过多个乙烯信号传导途径控制开花时间。
        B.7
        使用γcom的HCD数据完整N-和O链肽鉴定
        Katalin F. Medzihradszky.1,杰森玛纳德1,Krista Kaasik1,马歇尔伯尔尼2
        1加州大学,旧金山,加州,美国; 2彩易福彩指标,圣卡罗斯,加州,美国
        糖基化彩易福彩高质量分析的重要性稳步增加。细胞内GLCNAC改性的调节和信号功能都被广泛记录,并且已经开发出Glcnacylated肽的不同富集策略。细胞外糖基化已与各种疾病联系在一起,并且N-和O-糖基化在提供某些彩易福彩的结构完整性,控制彩易福彩清除,彩易福彩 - 彩易福彩相互作用和酶促加工方面起着重要作用。此外,大多数彩易福彩药物是糖基化的,因此,这些药物的分批表征这些药物也涉及糖基化分析。
        在上个世纪末,质谱已经成为分析翻译后修改的首选方法,并且为许多不同的PTMS开发了高吞吐量工作流程。虽然质谱已经用于表征单个蛋白的N-和O-糖基化,但其高通量施用被一些问题预防。这些问题包括非图案基于基于寡糖的寡糖结构,异构结构块,以及在碰撞激活时的广泛碳水化合物碎片。深入的碳水化合物分析仍然需要不同的工具:使用各种分析方法进行研究或未修饰的释放的聚糖池,例如毛细管电泳,色谱,外糖苷酶鸡尾酒和NMR。虽然这些技术将提供有关糖单位和它们的联系的身份的信息,但损失了彩易福彩序列和其位点特异性异质性的聚糖定位的信息。保留肽侧链修饰的电子转移解离使得完整糖肽的MS / MS分析,并导致成功分配数千种Golcnacy序列和Golgi衍生的糖肽。这促进了完整的糖肽分析,并且搜索引擎,例如彩易福彩探测器和致癌可以处理甚至复杂的聚糖混合物。最推荐的采集工作流程使用通过HCD分析产生的诊断己酸氧化离子来触发ETD分析。不幸的是,由于细胞外糖基化显着增加肽质量而没有加入额外的电荷,糖肽经常产生低电荷密度前体离子,其仅在ETD活化时产生电荷减少的分子。然而,适当获得的HCD数据可能包含足够的糖肽鉴定的信息。已经调整了对这种光谱的解释的调整。我们将使用WGA凝集素弱亲和层析从小鼠脑突触骨体中分离的复合的N-和O链肽的混合物中的结果介绍,突出了这种方法的优点和限制。
        这项工作得到了NIH Grant Nigms 8P41GM103481,并由Howard Hughes Medical Institute(对UCSF的生物有机生物医学质谱资源,主任:A.L.Burlingame)。
        B.8
        导致糖肽分析的复杂性的因素 - 除了特异性异质性
        Katalin F. Medzihradszky.1,Zsuzsa Darula
        1加州大学,旧金山,加州,美国; 2彩易福彩组学研究,生物学研究中心,匈牙利的实验室
        关于细胞外糖基化的生物学意义的数据正在编制。异常糖基化已涉及疾病。细胞外聚糖重塑已与细胞内信号传导连接。同时,高通量完好无损糖肽分析仍处于初期阶段。
        糖基化是一个“特殊的”PTM。它包括由不同的生物途径形成的各种结构,进行非常不同的生物学功能。在此方面,不同的MS / MS激活技术提供不同的线索来解决糖肽“难题”,但是没有提供所有必要的信息。离子陷阱CID提供有关聚糖结构的信息,通常揭示肽改性的质量。光束型CID(HCD)经常提供足够的碎片信息来分配修改的序列。然而,很少可能是O-Glycopeptides的现场分配。 ETD识别修改的序列和站点,但必须知道存在的聚糖。因此,将所有这些数据一起使用将提供最佳解决方案。然而,即使是针对糖肽识别的搜索引擎也不能利用可用的所有信息。
        我们分析了由凝集素 - 亲和富集的小鼠突触骨组和牛或人血清样品的LC / MS分析产生的大而复杂的完整性糖肽数据集。我们将显示单独的ETD数据具有缺陷的单同步体前体峰分配,非特异性蛋白水解消化或共价肽修饰将“分配”不正确的甘草结构。我们还将介绍常见的缓冲液成分,TRIS - 广泛使用,甚至推荐用于凝集素 - 亲和层析 - 改变唾液酸,不仅改变其质量而且改变糖肽的色谱行为。 HCD分析在破译这种意想不到的副反应时有乐器。
        致谢 - KFM由NIH Grant Nigms 8P41GM103481支持,由Howard Hughes Medical Institute(对UCSF,Director:Al Burlingame的生物有机生物医学质谱资源以及以下拨款:OTKA 105611(Z. Darula) ,Baross-da07-da-eszk-07-2008-0036(对生物研究中心,有导演:P. Ormos)。 Z. Darula由Janos Bolyai奖学金支持。
        B.9
        使用PSMART,采集方法表征老化心脏的定性和定量全球变化
        Maryann S.Vogelsang.,Amol Prakas,David Sarracino,Gouri Vadali,Scott Peterman
        Thermo Fisher Scientific,Brims Center,剑桥,马,美国
        心血管系统已被证明是随着年龄的重大变化。这些变化范围从基因组到结构性。我们已经完成了使用新型数据采集方法,PSMART在老化小鼠中进行了无标记的定量全球分析和针对性分析。心脏组织被分离并从年轻(2个月大)和老(2岁)老鼠中均化。将溶解和消化的彩易福彩样品掺入PRTC肽保留时间训练器试剂盒并使用无偏依赖的数据依赖性采集(DDA)方法分析。使用非偏见DDA的初始表征实验促进了详细的小鼠心脏组织光谱库的建设。光谱库记录包含基于标准肽的相对保留时间信息以及高度自信的内源性肽,前体和产物离子信息,例如测量的质量值和用于产生共识产物离子光谱的相对丰度。光谱库信息用于创建参考信息,以实时执行Qual / Quan确定。 PSMART方法用于使用一个HR / AM MS和一系列窄的DIA质量窗口获得定性/定量数据分析。我们的PSPart策略每次运行比标准DDA运行的每次运行均有30%的肽标识。另外,使用PSMART,我们能够以具有MS / MS为每种肽的MS / MS在低丰度水平下确认MS1定量。这种新型采集使得能够定量先前鉴定的肽以及新颖的衰老靶标。通过识别和量化更多目标,我们能够更好地表征老化小鼠心脏功能障碍的动态彩易福彩组学变化。
        B.10
        巨噬细胞的定量位点特异性分析S-谷胱甘肽响应于工程纳米材料诱导的氧化应激
        吉成段 ,Vamsi K. Kodali,Matthew J. Gaffrey,贾国,Rosalie K. Chu,David G. Camp,Richard D. Smith,Brian Thrall,Wei-Jun Qian
        太平洋西北国家实验室,Richland,WA,美国
        工程纳米颗粒是具有独特物理化学性质的官能材料,这使得它们可用于商业和医疗应用。评估纳米材料的毒性并识别毒性的潜在机制非常重要。已知氧化应激在纳米材料诱导的细胞毒性中起重要作用,这导致活性氧物质的产生和彩易福彩活性的改变和细胞中的功能。然而,关于彩易福彩和与纳米材料诱导的氧化应激和纳米毒性相关的彩易福彩和信号通路的知识仍然有限。可逆的半胱氨酸基彩易福彩修饰,例如S-谷胱甘肽(SSG)和S-亚硝基化(SnO),代表了一种重要的机制,其响应于细胞中氧化还原平衡的扰动来调节多种细胞途径。这些氧化还原修改是响应纳米材料诱导的氧化应激和纳米毒性的潜在调节机制。最近,我们开发了一种有效的彩易福彩组学方法,可通过整合氧化半胱氨酸,树脂辅助富集的硫醇的彩易福彩的选择性降低和等异标标记来实现不同半胱氨酸的氧化还原修饰的有效彩易福彩组学方法,以使LC-MS /基于MS的量化。在此,我们通过定量位点特异性分析在暴露于不同纳米颗粒(COO,Fe3O4和SiO 2纳米粒子)后小鼠巨噬细胞中彩易福彩SSG修饰改变的初步结果。我们观察到,在这些纳米颗粒中,COO纳米粒子导致最显着的剂量依赖性细胞毒性和巨噬细胞中彩易福彩SSG修饰的增加。我们的特异性SSG数据突出了氧化还原敏感蛋白及其特定的Cys残留物,可能涉及氧化应激反应。功能分析显示,SSG改性蛋白最具富集的分子功能类别是自由基清除和细胞死亡/存活。该初步结果为彩易福彩SSG改性提供了一些见解,作为纳米材料诱导的氧化应激的潜在调节机制。
        B.11
        通过改变彩易福彩-SOX2相互作用,o-glcnac调节胚胎干细胞中的SOx2活性
        塞缪尔迈尔斯 1,Sairaja Pedadda,塔拉·弗赖德里克,肖恩托马斯,格雷戈克林斯,Michael Lopez,Marena Trinidad,Barbara Panning,Al Burlingame
        加利福尼亚大学,旧金山,加州,美国
        SOX2是一种多功能转录因子,可维持胚胎干细胞(ESC)多能性和自我更新,并且对于适当的谱系规范和成人干细胞维持是重要的。这种多功能性可能是由于翻译后修饰(PTM),因为据报道,SOX2被多种细胞类型中的许多化学部分改性。一种这种PTM是O-GlcNAc,细胞内蛋白的动态和调节糖基化。全局O-GlcNAC对于ESC自我更新至关重要,但不明白SOX2 O-Glcnacyation的功能。这里,我们表明SOX2是在反膜激活结构域中修饰的O-GlcNAc,并改变自我更新信号诱导SOx2 O-Glcnac化学计量的变化。在ESC中替换具有O-Glcnac缺陷型突变体Sox2的野生型Sox2增加了多能转录网络,同时降低涉及分化的基因。 SOX2与ESC的彩易福彩分析显示,WT和突变体SOx2与转录调节络合物的不同亚群相互作用。因此,通过调节SOX2活性和与表观遗传调节络合物的相互作用来调节SOX2 O-Glcnacylation调节ESC的转录景观。
        B.12
        通过肽免疫亲和富集和靶向质谱法进行口腔癌生物标志物核实的多重测定
        yung-chin hsiao1,朗明志2,昆益智事1,y婷陈1,Yu-Sun Chang1 ,武歌宇 1
        1昌龙大学,台湾陶元; 2台湾陶源昌涌纪念医院
        口腔癌是台湾和南亚其他地区的普通癌症,已成为该地区医疗保健系统的越来越大。虽然在过去的几十年中已经发现了许多潜在的口腔癌生物标志物,但它们中很少有核实和验证,以比较他们的临床效用。最近,已被证明是一种多路复用的靶彩易福彩组学测定平台,称为SISCAPA-MRM-MS(稳定同位素标准和通过与多重反应监测质谱法组合的抗肽抗体捕获)是用于验证多种彩易福彩生物标志物候选的可行方法体液样品。因此,我们寻求从发表的文献和内部数据库的生物标志物候选优先考虑生物标志物候选者,并开发出高通量/多路复用的SISCAPA-MRM-MS测定,用于量化潜在的口腔癌生物标志物候选。我们生产〜400克隆的抗肽mAb对50个选定的靶标,并根据其对肽抗原的结合亲和力(使用肽 - 固定的SPR系统)和免疫捕获能力来有效地将高质量的抗肽mAb与24个靶标免受24个靶标过滤。使用SISCAPA-MS测定)。然后将这些MAb组装成24-Plex Siscapa-MRM MS测定,并初步评估由口服癌症患者和健康对照中获得的合并唾液样品中的这些24种候选物。与健康对照相比,24例候选人中的八个在口服癌症患者的唾液样本中被发现急剧增加。这24-Plex Siscapa LC-MRM MS测定的承诺使我们能够在不久的将来系统地评估口腔癌生物标志物发现的临床样本中的丰富靶标。
        B.13
        通过质谱法的副Xovirus表面糖蛋白糖基化的表征
        Cassandra L.Pegg.1 ,C. Hoogland 1,三。约翰逊2,C.C. Gonzalez.2,m.e. peeples.2 ,J.J. 戈尔曼 1
        1澳大利亚Hurston Qimr Berghofer医学研究所; 2疫苗中心&美国哥伦布,俄亥俄州全国儿童医院研究所的免疫力
        家庭帕罗西克病(Paramyxovirus)含有许多重要人和动物病原体。在这个家庭中代表的是人类呼吸合胞病毒(HRSV),人类术治疗(HMPV)和新城疫病毒(NDV)。前两种原因婴儿,儿童和免疫表情的严重呼吸道疾病。目前,HRSV和HMPV无法使用安全且有效的疫苗。 NDV是新城疫(ND)的致病剂,涉及各种禽类。研究NDV的愿望是由于它在全球家禽行业的显着经济影响,而且潜在用作人类和动物使用的溶瘤剂和疫苗载体。此外,NDV的发现可以被翻译成与人类引起疾病的密切相关病毒,例如Parainfluenza病毒。对副缺氧病毒非常重要的是可变连接糖蛋白,血凝素(H),血凝素 - 神经氨氨酸酶(HN)和主要表面糖蛋白(G)以及融合(F)糖蛋白。糖蛋白H,HN和G涉及到宿主细胞的病毒附着,而F通过与宿主细胞膜的融合负责病毒进入。研究表明,存在于这些彩易福彩上的糖基化位点可以调节病毒感染宿主细胞并刺激宿主免疫系统的能力。特异性特异性聚糖异质性的表征仍然是与HRSV,HMPV和NDV表面糖蛋白有关的少数未探测的区域之一。已经进行了以前的研究以确定NDV F的聚糖异质性,但不是聚糖现场特异性,尚未在化学物质中定义甘草位点含有HRSV和HMPV和HMPV和HM的HMPV和HM的糖蛋白G和F的糖蛋白。等级。揭示这些彩易福彩的糖基化谱可以有助于阐明副缺斑病毒内的病毒附着,复制和免疫逃逸的机制。另外,需要彩易福彩糖基化的准确鉴定和表征,用于生产糖蛋白治疗剂和靶向治疗的发展。利用ETD,HCD和CID碎片的液相色谱-SMS / MS策略在结构上表征消化的糖蛋白。初始研究揭示了复合的N-连接和粘蛋白样O-连接的重组RSV G的糖基化。NDV的分析显示了F糖蛋白的高甘露糖N-连接聚糖以及高甘露糖和唾液酸盐和硫酸化络合物N-连接的聚糖和硫酸化合物NDV HN的一种新型唾液酸化的O型甘油。
        B.14
        开发一种新的体内交联质谱平台,以定义活细胞中的彩易福彩 - 彩易福彩相互作用
        Robyn M.凯克1,小荣王1,安东尼伯克1 ,克林顿yu. 1,Wynne Kandur.1,莹莹阳1,Eric J. Novtisky1,托尼亚第二2,吉成段1 ,萨奥 1,申盛关3,Danielle Vellucci.1,斯科特D. rychnovsky1, 兰黄 1
        1加利福尼亚大学,欧文,加州,美国; 2Thermo Fisher Scientific,Waltham,Ma,美国; 3加利福尼亚大学,旧金山,加州,美国
        彩易福彩 - 彩易福彩相互作用(PPI)是彩易福彩复合物的结构和功能的基础。在细胞中发生彩易福彩之间的物理接触对于揭示各种细胞活性的分子细节至关重要。为了推进PPI的研究,在活细胞中,我们在体内交联质谱平台上开发了一种新的膜可渗透,富集和MS可切割的交联剂,具有多级串联质谱。该策略允许来自哺乳动物细胞的体内交联产物的有效捕获,富集和鉴定,从而能够测定彩易福彩相互作用界面。通过在彩易福彩组规模和靶向彩易福彩复合物水平的哺乳动物细胞中分析PPI,证明了开发方法的效用。我们的作品代表了一种在体内PPI学习的一般方法,为未来的研究提供了稳固的研究,以实现生命系统中PPI网络的完全映射。
        B.15
        在天然和酸性条件下MS在CO-COMPRAY的双特异性抗体生产中优先链配对的高分辨率偏移表征
        Luis Schachner.,建惠周,卢克麦卡锡,迭戈·埃尔米曼,迈克尔·迪尔顿,Christoph Spiess,Jennie Lill,Paul Carter,Wendy Sandoval
        彩易福彩化学和抗体工程,Genentech,Inc.,南旧金山,加州,美国
        双特异性抗体具有两个不同单克隆抗体的特征和结合特异性,并且可以同时可以结合两种靶标或表位。双特异性抗体最近对他们的有前途的临床试验或潜在的新模式进行了很大的关注,以提供治疗方法。通过两种轻链和重链的共表达产生双特异性抗体,将导致几种错误的物种。虽然“旋钮入孔”技术使两条重链的有效杂叠化,但尚未详细地研究了轻链的假定随机错误,因为缺少了缺少异二聚体物种的技术。使用抗IL-4 / IL-13的双特异性抗体,其靶向IL-4和IL-13细胞因子,其中参与2型细胞因子诱导的炎症,我们描述了天然和酸性条件下的质谱表征测定 - 使用辐射加延长质量范围(EMR)玻璃仪仪器的抑制双特异性抗体。 EMR Orbitrap的高质量分辨率允许在共同表达时随机组装在体内随机组装的双特异性抗体的混合物中的所有光和重链配对变体的明确鉴定。使用EMR Orbitrap技术,我们识别并表征抗IL-13轻链的优先配对,以其对其同源重链。这种意外的非随机配对可以利用来指导用于生产双特异性抗体的单细胞解决方案的设计。
        B.16
        通过噪声和超高反馈控制细胞分化的低速率
        罗伯特Ahrends.,Asuka Ota,Kyle M. Kovary,Takamasa Kudo,Byung Ouk Park, 玛丽N.Teluel.
        化学与系统生物学,斯坦福大学,斯坦福大学,加利福尼亚州
        通过缓慢,持续的细胞分化通过替换老化或受损细胞来维持成年哺乳动物的组织尺寸。破坏这种持续分化的速度导致严重的疾病。例如,急性髓性白血病(AML)是由分化的嵌段引起的,这导致前体细胞不受控制地增殖而不是区分为更终端状态。脂肪细胞,葡萄糖和脂质代谢的关键调节剂,占人体质量的10-40%,并以每年约10%的速率更新[1]。将使用的adipocyte系统具有独特的优势,即终端分化转变使用单细胞显微镜具有相对较短且实验地访问。了解细胞如何调节这种非常缓慢的分化率可以更好地治疗代谢疾病和肥胖症。在这里,我们将定量质谱[2-4],计算建模和单细胞显微镜[5]组合以识别使得能够预脂肪细胞以每4天仅为0.5%的速率来区分网络架构。我们表明,在彩易福彩丰度的彩易福彩丰度中,彩易福彩丰度的细胞到细胞可变性或噪声是允许预脂肪细胞以非常低的速率区分脂肪细胞。该系统架构解决了两个基本的反对要求:在差异化状态下不可逆地锁定细胞,并产生大的细胞到小区信号可变性,以使差分差异为低速率。通过噪声和超高反馈连接的该优化问题的分辨率提供了哺乳动物组织尺寸控制的可推广机制。
        参考:
        1. [1] Spalding Kl等。 (2008)。人类脂肪细胞周转动态。 自然。 5月5日; 453(7196):783-7。
        2. [2] Abell E,Ahrends R,Bandara S,Park Bo,Teruel Mn。 (2011)。并行自适应反馈增强了CA2 +信令系统的可靠性。 Proc Natl Acad Sci U S a。 8月30日; 108(35):14485-90。
        3. [3] Ahrends R,Ota A,Kovary Km,Kudo T,Park Bo,Teruel Mn。 (2014)。通过噪声和超高反馈控制细胞分化的低速率。 科学 345, June 20.
        4. [4] Ota A,Kovary Km,Shen W,Ahrends R,Kraemer FB,Teruel Mn。使用选择性反应监测(SRM)质谱法在胰岛素抗性小鼠的脂肪组织储存之间剖面核蛋白丰度差异。 ( 提交 )
        5. [5] Park Bo,Ahrends R,Teruel Mn。 (2012)。连续的正反馈循环循环创建一个双稳态开关,其控制腹极细胞与adipocyte转换。 CELL报告10月 25.