第2届

        2.1
        使用定量质谱法解密蛋白酶体相互作用蛋白的动态
        X.王和 L. Huang.
        加州大学生理学和生物物理学和发育和细胞生物学部门,欧文,加利福尼亚州
        彩易福彩 - 彩易福彩相互作用是用于控制各种细胞过程中彩易福彩功能的主要机制之一。为了充分了解这些功能,彩易福彩 - 彩易福彩相互作用的全球测绘已成为当前彩易福彩组学研究的主要目标。与亲和纯化结合,基于质谱的互动彩易福彩组学成为分析功能蛋白复合物的选择方法。除了不同亲和力的相互作用之外,彩易福彩相互作用的动态是了解彩易福彩相互作用的功能的另一个重要方面。动力学可以分为两层:动态彩易福彩相互作用,其在细胞外信号传导的不同时间和细胞状态下在时间上变化,以及与其互动伴侣具有高结合和解离(即ON / OFF)率的那些。虽然已经做出了很多努力来了解第一层的相互作用动态,但缺乏有效的策略来区分稳定和动态的互动者阻碍了对对第二种类型的理解的努力。在这项工作中,我们开发了一种新方法,MAP(纯化后混合) - 孤立地调查彩易福彩复合物的相互作用通过质谱法。与原始氧化铝方法相结合,基于其相对丰富的比率变化,稳定和动态分量明确区分。我们应用了新开发的策略来破译26S蛋白酶体相互作用蛋白(PIPS)的动态,并鉴定了新推定的篇幅,而鉴定的交互运动的性质完全表征。报告的方法提供了彩易福彩组学技术的宝贵扩展,用于鉴定重要但先前无法识别的相互作用彩易福彩。
        2.2
        蛋白酶体复合物的彩易福彩组生物学:分子组织,功能和调节
        Ping
        生理学和医学系/心脏病学,NHLBI PPG对心肌缺血损伤,加州大学CVRL彩易福彩组核心实验室,加州大学,洛杉矶,加利福尼亚州
        蛋白酶体系在治疗哺乳动物细胞中的细胞内彩易福彩降解过程中起重要作用。这些蛋白酶体复合物的彩易福彩组生物学,即蛋白酶体亚基的组装,亚基的翻译后修饰以及复合物的关联伴侣,决定了这些多蛋白复合物的细胞内蛋白水解功能。使用细胞器彩易福彩组学方法,我们最近的研究已经确定了哺乳动物细胞类型中该细胞器的分子组织,功能和调节。
        2.3
        使用生物正交非甘露氨基酸标记(Boncat)鉴定新合成的彩易福彩。
        D. C. Dieterich.1,A. J. Link2,D. A. Trirell2,J. Graumann.1, 和 E. M. Schuman.1
        分工 1生物学/ hhmi和 2化学,卡特克,帕萨迪纳,加利福尼亚州
        彩易福彩合成和降解的改变能够使包括神经元的细胞,适应改变外部条件。在神经元中,越来越多的证据表明,局部树突蛋白合成用于允许个体突触动态地响应,以伴随突触连接的建立,维护和可塑性的环境变化。鉴定活性调制的树突彩易福彩组的承诺,以更全面地了解分子水平的突触塑性。分离和鉴定树枝状合成的彩易福彩,我们开发了一种新的彩易福彩标记策略,可与质谱结合使用。彩易福彩标记基于叠氮化物 - 炔烃连接,所述叠氮化物载体轴承非规范氨基酸氮杂卤胺(AHA),其用作蛋氨酸的替代物。随后可以用炔烃的亲和标记标记轴承AHA的彩易福彩。在胰蛋白酶纯化彩易福彩的胰蛋白酶消解之后,通过利用Mudpit(多维彩易福彩识别技术),然后进行生物信息分析来实现质谱分析。初始实验表明,AHA可以掺入新合成的HEK293细胞和培养的海马神经元中。在用甲硫氨酸代替AHA的对照实验中,在抗生物素蛋白色谱后没有回收生物素化的彩易福彩。鉴定了来自AHA(2小时)的抗生物素蛋白纯化的彩易福彩的质谱分析,鉴定了HEK293的全细胞裂解物超过190个彩易福彩,包括过表达对照蛋白。为了鉴定树突状彩易福彩组,分析了来自大鼠脑突触金属孢子体或分离的海马培养的枝枝的新合成彩易福彩。
        D.C.D.德国自然科学家莱奥多瓦省(BMBF-LPD9901 / 8-95)支持。