具有新型捕获离子迁移率质谱仪的在线平行累积 - 串行碎片(PASEF)

      在自下而上的蛋白质组学中,用洗脱液用液相色谱分离肽 峰值宽度在几秒钟内,而大约100的质谱 微秒与飞行时间(TOF)仪器。这允许添加离子移动性 作为分离的第三个维度。在几种格式中,被困离子迁移率光谱法 (TIMS)由于其小尺寸,低电压要求和高,因此具有吸引力 离子利用效率。我们最近展示了并行扫描模式 累积 - 串行碎片(Pasef),其乘以排序速度 没有任何敏感性损失(Meier 等等。,PMID:26538118)。在这里,我们介绍了最佳实现的TimStof Pro仪器 在线pasef。它具有离子移动装置的正交离子路径,限制 进入仪器的碎片量并使其在日常操作中非常稳健。 我们对霰弹枪蛋白质组学的不同前兆选择方案进行了最佳地 每秒分配超过100个碎片事件。超过600,000个碎片 标准120 min LC运行中的光谱是可实现的,可用于近穷举 复杂混合物中的前体选择或累积弱前体的信号。 在120分钟的单次Hela消化中,MaxQuant鉴定了6,000多种蛋白质 不与图书馆匹配并具有高的定量再现性(R> 0.97). 在线PaseF达到了令人瞩目的敏感性,鉴定了超过2,500个蛋白质 在30分钟内只有10 Ng Hela消化。我们还显示出高度可重复的碰撞 可以在大规模上获得横截面(r>0.99)。 timstof pro上的pasef 是蛋白质组学技术工具箱的宝贵补充,其中一些 独特的操作模式,只能开始探索。

      图形概要

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