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LC-MS / MS分析对大鼠肾脏收集管细胞的顶端和基底外血浆膜* S.

      我们使用生物素化和链霉抗生物素蛋白亲和色谱法标记并丰富 来自大鼠肾内髓质收集的顶端和基石外膜的蛋白质 在LC-MS / MS蛋白质鉴定之前的管道(IMCD)。丰富顶端膜 蛋白质和结合的外周膜蛋白,IMCDS灌注标记 伯胺反应性生物素化试剂在2℃下使用双桶移液管。 与它们结合的灌注 - 生物素化的蛋白质和蛋白质 Captavidin-琼脂糖珠,用SDS-PAGE分开,切成连续凝胶 用于LC-MS / MS蛋白质识别(LTQ,Thermo Electron Corp.)的碎片。 17积分 和糖基磷脂酰肌醇(GPI) - 链接膜蛋白和44个非积分 鉴定膜蛋白。免疫荧光共聚焦显微镜证实 ACVRL1, H+ / K. +-ATPaseα1,NHE2和IMCD中的绷紧表达。基底膜和基石 膜蛋白通过与生物素化的IMCD悬浮液孵育是生物素化的 冰上的试剂。 23积分和GPI连接膜蛋白和134个非积分 鉴定膜蛋白。优先的非整体膜蛋白分析 在灌注 - 生物素化而不是在孵育 - 生物素化的IMCD中鉴定 透露蛋白质激酶,支架蛋白,鼻塞蛋白,电机蛋白,小 GTP结合蛋白质,以及可参与血管加压素刺激的相关蛋白质 AQP2,UT-A1和ENAC规则。构建了全球网络访问数据库 来自该研究的222例膜蛋白(积分和GPI与GPI连接)和事先研究。

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